技术文章您的位置:网站首页 >技术文章 >怎样用酶标仪检测氟喹诺酮

怎样用酶标仪检测氟喹诺酮

发布时间:2021-01-03   点击次数:61次

一、概要:
       氟喹诺酮类(FQNS)又称吡酮酸类或吡啶酮酸类,是一类十分重要的广谱抗生素药物,能抑制细菌DNA螺旋酶。其常在牛、猪和鸡等家禽养殖中被作为兽药使用。特别是鸡、猪和鱼/虾等的养殖企业均使用其来防治家禽传染病已成为兽医临诊和水产养殖中最重要的抗感染药物之一,由于其耐药性和潜在的致癌性引起广泛的关注。欧盟理事会条例中对部分氟喹诺酮类药物的最大限量值MRL作出了明确的规定。
二、试验原理
       采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被氟喹诺酮类抗原,样品中残留的氟喹诺酮类药物和微孔条上预包被的抗原竞争抗氟喹诺酮类抗体,加入酶标二抗后,经TMB底物显色,样品的吸光值与其残留物氟喹诺酮类药物的含量成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中残留物氟喹诺酮类药物的含量。
三、使用范围:
       可定性、定量检测肌肉、肝脏、牛奶、奶粉等样品中氟喹诺酮类药物的残留量。
四、使用设备及试剂

  ……酶标仪 450nm/630nm 

  ……离心机 

  ……均质器 

  ……氮吹仪或旋转蒸发器 

  ……洗耳球

  ……聚苯乙烯离心管:10mL、50mL 

  ……微量移液器20μL~200μL,100μL~1000μL

  ……刻度移液管 

  ……天平:感量0.01g 

  试剂:

  ……甲醇 (分析纯)

  ……二氯甲烷 (分析纯)

  ……正己烷(分析纯)

  ……浓盐酸

  ……十二水磷酸氢二钠(分析纯)

  ……二水磷酸二氢钠(分析纯)
五、检测步骤:
测定前应须知:
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20~25℃)。
2、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。
3、在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。
操作步骤:
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~25℃)回温30min以上,注意每种液体试剂使用前均需轻轻摇匀。
2、取出所需数量的微孔板,将不用的微孔放入带有干燥剂的锡箔袋中,保存于2~8℃。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号:将样品和标准品对应微孔按序编号,每个样品和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样品孔所在的位置。
5、加标准品/样品:加标准品/样品50ul/孔到对应的微孔中,然后加入抗试剂50ul/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15min。
6、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤工作液250ul/孔,充分洗涤4~5次,每次间隔10~20s,用吸水纸拍干(拍干后若有气泡可用未使用过的枪头戳破)。
7、加酶标物:加入酶标物100ul/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15min,取出重复洗板步骤6。
8、显色:加入底物液A液50ul/孔,再加底物液B液50ul/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应10~15min。(如颜色较浅可适当延长此步的反应时间)
9、测定:加入终止液50ul/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,请在5min内读完数据),测定每孔OD值。

在线咨询
在线客服
咨询热线

18853116301

[关闭]