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总糖的测定---蒽酮比色法

发布时间:2020-12-05   点击次数:496次

一、实验目的 

掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 

二、实验原理 

强酸可使糖类脱水生成糠醛,生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在620nm处有大吸收。在10-100ug范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度,糖含量在 30ug左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适。 

三、仪器、试剂和材料 

1 .仪器 

(1) 分光光度计 

(2) 电子顶载天平 

(3) 三角瓶: 50m1 X 1 

(4) 大试管: 9 支 

(5) 试管架,试管夹 

(6) 漏斗,漏斗架 

(7) 容量瓶: 50 m1 X 2 

(8) 刻度吸管: 1m1X3 , 2m1X1 , 5mlX1 

(9) 水浴锅 

2 .试剂 

(1) 葡萄糖标准液: l00ug/ml 

(2) 浓硫酸 

(3) 蒽酮试剂:0.2g 蒽酮溶于100ml浓 H2SO4中当日配制使用。 

3 .材料 

小麦分蘖节(或者其它材料)。 

四、操作步骤 

1 .葡萄糖标准曲线的制作 

取7支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液: 

 

管号 

葡萄糖标准液( ml ) 

0.1 

0.2 

0.3 

0.4 

0.6 

0.8 

蒸馏水( ml ) 

0.9 

0.8 

0.7 

0.6 

0.4 

0.2 

葡萄糖含量( ug ) 

10 

20 

30 

40 

60 

80 

 

在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴(水浴锅)中,管口加盖玻璃球,以防蒸发。自水浴重新煮沸起,准确煮沸 l0min 取出,用流水冷却,室温放置 10min ,在 620 nm 波长(分光光度计)下比色。以标准葡萄糖含量(ug) 作横坐标,以吸光值作纵坐标,作出标准曲线。 

2 .植物样品中可溶性糖的提取 

将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下,准确称取 1g(电子天平), 放入 50m1三角瓶中,加沸水25m1,在水浴中加盖煮沸10min ,冷却后过滤,滤液收集在50m1容量瓶中,定容至刻度。吸取提取液2m1(移液枪) ,置另一50m1 容量瓶中,以蒸馏水稀释定容,摇匀测定。 

3 .测定 

吸取lml 已稀释的提取液于大试管中,加入4.Oml 蒽酮试剂,以下操作同标准曲线制作。比色波长 620nm ,记录吸光度,在标准曲线上查出葡萄糖的含量(ug)。 

查表所得糖含量(ug)×稀释倍数 

五、注意事项 

1 该显色反应非常灵敏,溶液中切勿混入纸屑及尘埃。 

2 H 2 SO 4 要用高纯度的。 

3 不同糖类与蒽酮的显色有差异,稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。 

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